फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या: पद्धत तत्त्वे

प्रकाश पुढील अजैविक आणि जैविक द्रव शोषण आणि पुन्हा उत्सर्जन झगमगाट किंवा फ्लूरोसेन्सचा परिणाम आहे. घटना फरक प्रकाश स्त्राव बंद शोषण आणि उत्सर्जन दरम्यान मध्यांतर कालावधी आहे. या प्रक्रिया फ्लूरोसंस जवळजवळ एकाच वेळी येऊ तेव्हा झगमगाट असताना - काही उशीर आहे.

ऐतिहासिक माहिती

1852 मध्ये, ब्रिटिश शास्त्रज्ञ स्टोक्स, प्रथम फ्लूरोसेन्सचा वर्णन केले आहे. तो प्रयोग एक परिणाम म्हणून एक नवीन पद ओळख fluorspar, थरात अतिनील प्रकाश अंतर्गत लाल प्रकाश सोडणे आहे. स्टोक्स एक स्वारस्यपूर्ण इंद्रियगोचर नोंद. तो आणि विजेचे किरणे तरंगलांबी नेहमी उददीपनाचे प्रकाश प्रवाह जास्त आहे असे आढळले आहे.

19 व्या शतकात गृहीते याची पुष्टी करण्यासाठी तेथे अनेक प्रयोग केले आहेत. ते नमुने विविध थरात अतिनील प्रकाश प्रभाव पडतो fluoresce झाली आहे. साहित्य हेही इतर गोष्टी, केले क्रिस्टल्स, राळ, खनिजे, क्लोरोफिल, क्रूड औषधे, अजैविक, जीवनसत्त्वे, तेल यांचा समावेश आहे. जैविक चाचण्या डाईज थेट वापर 1930 मध्ये फक्त सुरुवात

फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या: वर्णन

20 व्या शतकात अभ्यास पहिल्या सहामाहीत वापरलेले साहित्य काही उच्च विशिष्टता प्रदर्शन. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. पद्धती contrasting साध्य करू शकणार नाही, कामगिरी, धन्यवाद, फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या पद्धत बायोमेडिकल आणि जैविक संशोधन एक अत्यावश्यक साधन बनले आहे. तितकेच महत्त्वाचे परिणाम प्राप्त, आणि साहित्य होते.

? काय फायदे फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या पद्धत का? नवीन साहित्य करणे शक्य झाले आणि अत्यंत विशिष्ट सेल submicroscopic घटक निवड आहे. फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या एकच रेणू ओळखू शकतो. डाईज विविध एकाच वेळी अनेक आयटम ओळख परवानगी देते. उपकरणे, जे, यामधून, नमुना विशिष्ट गुणधर्म अवलंबून असते diffraction मर्यादा मर्यादित अवकाशीय ठराव असूनही, या पातळी खाली रेणू ओळख देखील जोरदार शक्य आहे. विविकरणाची प्रदर्शित autofluorescence नंतर विविध नमुने. या इंद्रियगोचर मोठ्या प्रमाणावर खडकांचे, वनस्पतिशास्त्र, सेमीकंडक्टर उद्योगात वापरला जातो.

वैशिष्ट्ये

प्राणी उती किंवा रोगजनकांच्या अनेकदा क्लिष्ट किंवा खूप कमकुवत किंवा फार मजबूत unspecific autofluorescence अभ्यास करा. तथापि, अभ्यास मूल्य विशिष्ट तरंगलांबी येथे उत्सुक साहित्य घटक मध्ये परिचय आणि आवश्यक प्रकाश प्रवाह तीव्रता emitting मिळविते. Fluorochromes स्वतंत्रपणे सक्षम डाईज संरचना (दृश्यमान किंवा अदृश्य) संलग्न म्हणून काम. त्यामुळे ते लक्ष्य एक उच्च निवड, आणि भाग उत्पन्न आहे.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या मोठ्या प्रमाणावर नैसर्गिक व कृत्रिम डाईज घटने किंवा प्रसंगाचे आगमन पासून वापरले गेले आहे. ते उत्सर्जन आणि उददीपनाचे काही तीव्रता प्रोफाइल बाधा आणि विशिष्ट जैविक लक्ष्य लक्ष्य.

वैयक्तिक रेणू ओळख

अनेकदा, आदर्श परिस्थिती मध्ये, आपण एक स्वतंत्र घटक ग्लो नोंदणी करू शकता. या साठी, इतर गोष्टींबरोबरच, तो आवश्यक डिटेक्टर आणि ऑप्टिकल पार्श्वभूमी पुरेशी, कमी आवाज प्रदान करणे हे आहे. मुळे photobleaching सोडणे अप 300 हजार. फोटॉन अपयश डोळ्याच्या पारदर्शक पटलावरिल क्षते ओळखण्याकरिता वापरण्यात येणारा रंग परमाणू. येथे प्रक्रिया 20% संग्रह कार्यक्षमता आणि सुमारे 60 हजार रक्कम त्यांना नोंदणी करू शकता.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. लोट photodiodes किंवा इलेक्ट्रॉनिक गुणाकार आधारित फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या, संशोधक दुसरा माध्यमातून वैयक्तिक रेणू वर्तन देखणे परवानगी, आणि काही बाबतीत अगदी मिनिटे.

अवघडपणा

ऑप्टिकल आवाज पार्श्वभूमी दडपशाही नावे एक की समस्या. मुळे फिल्टर आणि दृष्टीकोनातून काही autofluorescence प्रदर्शित डिझाइन मध्ये वापरलेले साहित्य अनेक, लवकर पायऱ्यांमध्ये शास्त्रज्ञांचे प्रयत्न कमी फ्लूरोसेन्सचा येत घटक उत्पादन देणारं होते की. तथापि, त्यानंतरच्या प्रयोग नवीन निष्कर्ष झाली आहे. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. विशेषतः, तो फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या, एकूण अंतर्गत प्रतिबिंब आधारित, तो कमी पार्श्वभूमी आणि उच्च तीव्रता उददीपनाचे प्रकाश साध्य करण्यासाठी परवानगी देते असल्याचे आढळून आले.

यंत्रणा

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. एकूण अंतर्गत प्रतिबिंब आधारित फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या तत्त्व, तात्पुरते लाट किंवा तात्पुरते वापर आहे. हे विविध मीडिया दरम्यान सीमा उद्भवते refractive निर्देशांक. या प्रकरणात, प्रकाश तुळई त्रिकोणाकृती घन जातो. तो एक उच्च refractive निर्देशांक घटक आहे.

त्रिकोणाकृती घन कमी पॅरामीटर सह पाण्यासारखा समाधान किंवा काच लागून. अधिक गंभीर आहे की कोनात तो दिग्दर्शित प्रकाश तुळई तर, तुळई पूर्णपणे संवाद पासून प्रतिबिंबित झाली आहे. या इंद्रियगोचर, यामधून, nonpropagating लाटा होतो. दुसऱ्या शब्दांत, एक अंतर 200 पेक्षा कमी nanometers कमी refractive निर्देशांक घटक मध्यम मध्ये penetrates व्युत्पन्न इलेक्ट्रोमॅग्नेटिक फील्ड.

तात्पुरते लाट प्रकाश तीव्रता fluorophores जागृत करण्यासाठी पुरेसा होईल. तथापि, त्याचे अत्यंत लहान खोली, त्याच्या खंड खूप लहान असेल. परिणाम कमी-स्तरीय पार्श्वभूमी आहे.

बदल

फ्लूरोसेन्सचा सूक्ष्मदर्शकाच्या एकूण अंतर्गत प्रतिबिंब आधारित आहे, Epi-प्रदीपन सह अंमलबजावणी जाऊ शकते. या उच्च सांख्यिकीय छिद्र असलेल्या दृष्टीकोनातून आवश्यक (किमान 1.4, पण तो 1.45-1.6 गाठली घेणे हितावह आहे), आणि अंशतः क्षेत्रात उपकरणे प्रकाशित. नंतरचे एक लहान स्पॉट आकार गाठला आहे. अधिक एकसारखेपणा प्रवाह एक भाग अवरोधित केले आहे जे एक पातळ रिंग वापरून. गंभीर कोन, ज्यानंतर एकूण प्रतिबिंब आहे, आम्ही लेन्स बुडवून मध्यम आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली कव्हर काचेच्या अपवर्तन एक उच्च पातळी आवश्यक आहे.